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动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒

动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒

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动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒:产品特点:TM Tissue Genomic DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术,高效去除组织蛋白等各种干扰物,提取高纯度的 DNA。试剂盒采用独特的缓冲系统,可从多种不同类型动物组织和细胞中快速速提取基因组DNA。

  • 产品描述

动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒

Tissue Genomic DNA Extraction Kit

(快速型)(适合从动物组织和细胞中提取基因组 DNA)

 

试剂盒组成 :50 (50 次)

储存条件:本试剂盒在室温(15-25 ℃)下可保存一年。

产品特点:TM Tissue Genomic DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术,高效去除组织蛋白等各种干扰物,提取高纯度的 DNA。试剂盒采用独特的缓冲系统,可从多种不同类型动物组织和细胞中快速速提取基因组DNA。

注意事项:

1.实验前准备工作:在实验开始前,详细阅读该手册熟悉各步骤,并准备好所有的试剂盒组分,1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管,以及 37 ℃和 65 ℃ 的温浴条件。

2.KBL1 和KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀,可在37-50℃温浴片刻。

3.Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇。每次使用后,请立即拧紧盖子。

操作步骤:

(一)平衡吸附柱

1.取一 TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上(已备)。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内,室温 13 000 rpm 离心 1 min,使平衡液完全流过柱子。弃收集管中的滤液,将空柱套回收集管内。

注意:柱子不平衡,将导致 DNA 产率减少。

(二)样品处理

2.A. 组织破碎:  可根据不同样品选择以下方法:

1)液氮研磨: 组织直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软,再加少量液氮,再研磨,如此三次,按 5-50 mg 组织/1ml 加入 KBL1,

混匀,静置 2 min, 转入离心管, 13,000 rpm, 常温离心,2  min (低温可能造成

KBL1 结晶,应在 50℃下保持 KBL1 溶解状态)。

2)直接研磨: 对于新鲜的动物组织, 可以按照 5-50 mg 组织/1ml 加入

KBL1,直接研磨后,转入离心管, 13,000 rpm 常温离心,2 min。

3)匀浆:组织样品按每 5-50 mg 组织加入 1 ml KBL1。用电动匀浆器充分匀浆约需 1-2 分钟。匀浆液转入离心管, 13,000 rpm  常温离心,2 min。(效果,强烈推荐)

B. 裂解细胞:培养贴壁细胞:不须消化,可直接用 KBL1 进行消化、裂解,KBL1 体积按 10 cm2/ml 比例加入; 悬浮细胞可直接收集、裂解,每1ml KBL1 可裂解 5×106 动物细胞, 裂解液加入后,静至 2min. 转入离心管, 13,000 rpm 常温离心,2 min。

注意:基因组 DNA 的纯度取决于 KBL1 的体积和标本的量,理论上KBL1 的体积越大,标本的量越少, DNA 质量越好! 不同的组织有不同的比例,请在正式实验前摸索。

(三)吸附

3.将上清液或裂解液转移到已平衡过的吸附柱內,室温 13 000 rpm 离心 30 s,使裂解液完全流过柱子。保留柱,弃去收集管中的过滤液,将吸附柱重新放入收集管。

注意:1)室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀,在 37 ℃温浴片刻即可。 2)如混合液体积过大,可以分成数次上柱,每次上样量不要超过 700 μl。

4.(可。┘尤 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上,37 ℃放置 5-10 min。

注意:本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说,这一步没有必要, 因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA,可采用这一步处理。

(四) 漂洗

5.加入 700 μl Buffer KW1,室温 13 000 rpm 离心 30 s,弃去收集管中的过滤液,保留柱。

6.加入 700 μl Buffer KW,室温 13 000 rpm 离心 30 s,弃去收集管中的过滤液,保留柱。

注意:Buffer KW 在首次使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇,并置于室温下保存。

7.(可。┲馗从 700 μl 70%乙醇(室温)洗涤柱子。室温 12 000 rpm

离心 1 min。

8.弃收集管中的滤液,将空柱套回 2 ml 收集管内。室温下,最高转速或 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意:此步骤不可省,否则将导致乙醇残留于 DNA 中,影响后续反应。

(五)洗脱

9.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上,加入 50 μl 的 KE(可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl,pH 8.0 或纯水代替,纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0),65 ℃放置 5-10 min,13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。(也可以将 KE 预热至 65℃,再加至膜上,可以减少放置时间至 1min)

注意:小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位,并确保液体将膜全部覆盖。

10.DNA 可保存于 4 ℃,若长时间保存,可冻存于-20 ℃。

动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒

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76104RNAlater (50ml)
76106RNAlater (250ml)
761115PAXgene Blood DNA Tube (100)
761133PAXgene Blood DNA Kit (25)
76154RNAlater TissueProtect Tubes (50x1,5ml)

 

 

由于版面有限,先了解更多关于产品信息,请致电:020-8257 4011或添加Q:30128 18662 联系。

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